рментом: субстраты, связывающиеся более прочно*.

имеют более 'низкие значения Км,. Следует, однако, иметь в виду, что»

условие может выполняться для одних (более плохих) субстратов и совсем не выполняться для других.

На рнс. 6-2 изображена теоретическая зависимость скорости реакции от концентрации субстрата, описываемая уравнением (6-15). На осш ординат отмечено положение максимальной скорости (Ушах), однако» совершенно ясно, что, за исключением тех случаев, когда величина Км. чрезвычайно мала, экспериментально наблюдаемая скорость (и) никогда не может достичь значения Vm&x, а лишь асимптотически приближается к нему. Из (рис. 6-2 можно определить Км: она равна значению [S], при котором v = Vmax/2. Следует отметить, что из-за трудности определения величины Ушах график, представленный на рис. 6-2, используется довольно редко. Однако он очень нагляден и с появлением методов оценки параметров Vm&x и Км с помощью ЭВМ вновь начинает применяться. Отметим также, что кривая, представленная на рис. 6-2, совпадает по форме с кривыми насыщения для случая обратимого связывания (рис. 4-1).

6. Линейные формы уравнений скорости

^- — — - "J —. w >

линейных форм, 'например

1 1 , Км 1

Чтобы найти .параметры Км и Vmax из экспериментально полученных; значений скорости, можно преобразовать уравнение (6-15) в одну из?

(6-19>

Построение графика двойных обратных координат {1/[S]; \fv) (графика Лайнуивера— Бэрка; рис. 6-3, Л) позволяет определить величины* /См/Vmax н 1/Утлх; они равны наклону прямой н длине отрезка, отсекаемого ей на оси ординат^ соответственно. Лучше использовать график зависимости f/[S] от v (график Эди — Хофсти), который близок графику Скзтчарда (рис. 4-3) 1>:

v Vmax « 1 (6-20)

с

Несмотря иа то что точку с координатами [S] =0, и=0 нельзя отложить на графике, отношение vf\[S] при v—И) стремится к вполне определенной величине, равной Утях/Км. Обратите внимание иа распределеФПС. 6-3. Линейные анаморфозы уравнения Мнхаэлиса — Ментен. А. График зависимости 1/у от I/[S] (график двойных обратных координат, нлн график Лайнуивера — "Бэрка). Отрезок, отсекаемый прямой на осн ординат, равен l/Vmtx, а наклон — 'Лм/Утах. Б. График зависимости v/[S] от v (график Эди — Хофстн). Наклон прямой (равен —1(Кл, а отрезки, отсекаемые на осях ординат и абсцисс, равны соответственно

Vmax/Км. И Ушах.

*ние точек на прямых, изображенных на рис, 6-3. Концентрации субстрата выбирались с таким расчетом, чтобы увеличение скорости от точки *к точке было более или менее постоянным (к чему следует стремиться здри проведении эксперимента). На графике Эди — Хофсти, как и на исходном графике зависимости v от >[?>], точки распределены довольно ^равномерно, а на графике Лайнуивера — Бэрка они сконцентрированы в начале ,прямой. Второе преимущество графика Эдн — Хофстн состоит -в том, что он позволяет отложить на одной прямой точки, охватывающие полный интервал возможных значений концентрации субстрата, — <от нулевой до бесконечно большой.

При рассмотрении данных по контролю метаболизма путем регуляции ферментативной активности часто (пользуются графиком зависимости v от lg[S] (рис. 64). Он также дозволяет охватывать полный интервал возможных концентраций субстрата (если не считать точки, отвечающей [S] =0, т. е. lg[S] =—со). Поэтому для всех ферментов независимо от того, в каком интервале концентраций субстрата происходит •их насыщение, может быть использована одна и та же шкала. Зависимость v от lgf[S] является S-образной как для простых случаев, описываемых уравнением (6-15), так и для ферментов, связывающих субстрат кооперативно (разд. Б, 5). В этом случае приходится отказаться от нс*> Более надежные значения /См и Vm&x, чем график Лайнуивера — Бэрка, дает также следующая линейная анаморфоза:

° 'max 'MAX

(см. Cornish-Bowden A. Principles of enzyme kinetics, Butterworths, London, 1976 p. 26, 182; Ainsworth S. Steady-state enzyme kinetics, Macmillan Press, London, 1977 П>. 176). — Прим. перев.

пользованной выше классификации кривых («гиперболические» и «сиг* моидные»). Правда, из наклона кривых зависимости v от ig[S] в средней точке можно прямо оценить степень кооперативности (гл. 4Г разд. В, 7), но, поскольку из графика подобного типа неудобно определять величину Vmax 1>, кинетические параметры лучше определять с помощью линейной анаморфозы, построенной в координатах {и; u/[S]} (рис. 6-3,5). Можно использовать также статистические методы, основанные на применении ЭВМ и позволяющие рассчитать оба параметра

РИС. 6-4. График зависимости v от lg [S] для ферментативной реакции. В соответствии с уравнением (6-44) в присутствии конкурентного ингибитора вся кривая сдвинется вправо вдоль оси абсцисс, так что для полного насыщения фермента субстратом потребуются более высокие концентрации субстрата.

(/См и Vmax) и наилучшим образам построить кривую по экспериментальным точкам (рис. 6-4). При описании данных по кооперативному связыванию субстратов без ЭВМ обойт