ответствует 5% раствору безводного СаС12.

Ход определения. К 4,9мл дистиллированной воды прибавляют 0,1 мл сыворотки (свежей, негемолизи-рованной), тщательно перемешивают и прибавляют 0,1 мл 0,5% раствора хлорида кальция. Содержимое пробирки встряхивают и нагревают над пламенем горелки до однократного закипания смеси. Пробирку охлаждают и рассматривают содержимое в проходящем свете. Если белых хлопьев не обнаруживают, то добавляют еще 0,1 мл СаС12 и раствор вновь нагревают до кипения. Процедуру повторяют до тех пор, пока не выпадает хлопьевидный осадок. Результат оценивают, подсчитывая общее количество хлорида кальция, пошедшее на реакцию. В норме коагуляция наступает при добавлении 0,4—0,5 мл хлорида кальция.

Реакция коагуляции белков сыворотки может изменяться в двух направлениях: в'сторону увеличения или уменьшения количества раствора СаС12, пошедшего на реакцию. Применяют термины «сдвиг вправо» (уменьшение СаС12 для реакции) и «сдвиг влево» (увеличение СаСЬ для реакции).

Сдвиг вправо отмечается при болезни Боткина, острой желтой атрофии печени, циррозах, многих воспалительных заболеваниях (пневмонии, плеврите, туберкулезе легких).

Сдвиг влево обнаруживается при острых воспалительных и экссудативных процессах — остром ревматизме, нефрозах, злокачественных опухолях, больших потерях жидкости и др.

238

239

Тимоловая проба (по Хуэрго и Поппер). При взаимодействии сыворотки крови с тимолово-барбиталовым буфером появляется мутность, вследствие образования гло-булино-тимоловофосфолипидного комплекса.

Реактивы: 1) 10% спиртовой раствор тимола (10 г очищенного тимола растворяют в 96% этиловом спирте в мерной колбе вместимостью 100 мл);

2) буферный раствор (2,76 г барбитала, 2,06 г барбитал-натрия растворяют в мерной колбе вместимостью 1 л

дистиллированной водой и доводят объем до метки);

хранят в холодильнике; при выпадении осадка реактив

негоден к употреблению;

3) тимолово-барбиталовый буфер, рН 7,55—7,6 (в

мерной колбе вместимостью 100 мл смешивают 80 мл

буферного раствора и 1 мл спиртового раствора тимола,

встряхивают и доливают буферным раствором до метки);

проверяют рН:

4) стандартный раствор — суспензия BaSo4: а) раствор

хлорида бария (1,175 г хлорида бария ВаС12-2Н20 раство*

ряют в мерной колбе вместимостью 100 мл и доводят до

метки дистиллированной водой); б) 0,2 н. раствор серной

кислоты; в) перед употреблением 3 мл раствора хлорида

бария наливают в мерную колбу вместимостью 100 мл и

доводят до метки 0,2 н. раствором серной кислоты при

температуре 10° С.

Ход определения. К 6 мл тимолово-барбиталового буфера прибавляют 0,1 мл сыворотки крови, оставляют на 30 мин при комнатной температуре. Фотометрируют с красным светофильтром (длина волны 660 нм) в кюветах с толщиной слоя до 10 мм против раствора тимолово-барбиталового буфера. Расчет ведут по калибровочному графику.

Построение калибровочного графика. Из стандартного раствора (суспензии) сульфата бария готовят разведения, соответствующие единицам помутнения по j Shank и Hoagland (S—Н), как указано в табл. 11.

Таблица 11. Схема приготовления стандартных суспензий

Суспензия 0,2 н. HjSO,. Едыницы помутнения

BaS04, мл мл (S—Н)

1,35 4,65 5

2,70 3,30 10

5,40 0,60 20

Стандартные растворы смешивают, встряхивают и тотчас измеряют при тех же условиях, что и опытные против воды.

Нормальные данные тимоловой пробы 0—4 единиц (S-H).

Высокие цифры (единицы) тимоловой пробы отмечаются при острых гепатитах, циррозах печени в стадии обострения. Увеличенные цифры после перенесенного гепатита свидетельствуют о том, что патологический процесс в печени полностью не прекратился.

Глава II

ФЕРМЕНТЫ И ИХ РОЛЬ В ОРГАНИЗМЕ

ФЕРМЕНТЫ — БИОЛОГИЧЕСКИЕ КАТАЛИЗАТОРЫ

§ 115. Свойства

Ферментами называются вещества белковой природы, которые способны каталитически ускорять протекание биохимических реакций в живом организме. Синтезируемые в клетках ферменты обеспечивают реакции преобразования веществ, составляющих материальную и энергетическую основу жизни. И. П. Павлов сказал о ферментах, что они есть «в полном смысле возбудители жизни».

В настоящее время вопрос о белковой природе ферментов решен настолько определенно, что под словом фермент автоматически подразумевается белок. По строению ферменты могут быть простыми белками — протеинами и сложными — протеидами. В состав последних входит, помимо белковой части, добавочная группа небелковой природы, часто составляющая незначительную часть всей молекулы фермента.

Химическая природа добавочных групп достаточно разнообразна: витамины или вещества, построенные с их участием, нуклеотиды и их производные, ионы металлов. Необходимо отметить, что только комплекс белка с добавочной группой обладает каталитической активностью. Ферменты, как и белки, характеризуются строго определенным составом аминокислот, их последовательностью и расположением полипептидной цепи в пространстве (например, в форме клубка или диска). Некоторые ферменты состоят из нескольких субъединиц, м