о электрофореграмму разрезают на отдельные полоски, ориентируясь на светлые участки между белковыми фракциями. Каждую полоску с индивидуальной фракцией

231

помещают в отдельную пробирку или стаканчик. К глобу-линовым фракциям добавляют по 5 мл 0,01 н. раствора едкого натра, а к фракции альбумина—15 мл. Содержимое пробирок осторожно встряхивают и оставляют на 40—60 мин. Измерение производят на ФЭКе с зеленым светофильтром в кювете с толщиной слоя 5 мм. Все величины экстинкции (оптической плотности) складывают (экстинкцию альбумина умножают на 3). Принимая сумму экстинкции за 100%, вычисляют процентное содержание каждой фракции.

Пример. Экстинкция альбуминов — 0,21; глобулинов:

а, —0,05; а2—0,07; р—0,12; у—0,18. Сумма равна 1,05 (с

учетом умножения экстинкции альбуминов на 3). Принимая данную сумму за 100%, вычисляем содержание

отдельных фракций: 4

1,05

0,05'100 ~ 1,05

6,7%;

0,63 100 „ „„ 1

альбумин=—гт^—=60,0%;

ГЛобуЛИНЫ Oil

0,07-100

11,4%; 17,1%.

а 2=

1,05

0,12-100_ = 1,05 =

0,18.100 = 1,05

Зная концентрацию общего белка, можно легко вычислить значения всех фракций в граммах на литр.

Пример. Концентрация общего белка—85 г/л. Воспользуемся теми же значениями экстинкции. Тогда доля 0,63-85 , ?,

альбуминов равна: =51 г/л.

Таким образом производят расчет и для всех осталь-^ ных фракций.

Процентное соотношение белковых фракций в норме составляет: альбумины — 56,5—66,8%; а ^глобулины-3s0—5,6%; а2-глобулины — 6,9—10,5%; В-глобулины-7,3—12,5%; -у-глобулины—12,8—19,0%.

§ 111. Определение остаточного азота крови прямой реакцией с реактивом Несслера

В процессе минерализации фильтрата крови выделяющийся азот взаимодействует с серной кислотой и образует сульфат аммония. При добавлении к нему реактива Несслера образуется комплексное соединение желтого цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию азота в крови.

232

Реактивы: 1) реактив для осаждения белка (в колбу вместимостью 100 мл помещают небольшое количество воды, 0,5 г сульфата натрия, 0,5 г фосфорномолибденовой кислоты Н 7Р(Мо 20 7) 6 и 9,5 мл серной кислоты (с относительной плотностью 1,84); доводят объем до КЮ мл дистиллированной водой);

2) реактив Несслера (выпускают в готовом виде);

хранят в темной склянке;

3) 50% раствор едкого натра;

4) серная кислота концентрированная (относительная плотность 1,84);

5) стандартный раствор сульфата аммония (на аналитических весах в стеклянном бюксе взвешивают 0,4716 г сульфата аммония и растворяют его в небольшом количестве дистиллированной воды; растворенный реактив из бюкса количественно переводят в мерную колбу вместимостью 100 мл, затем доливают дистиллированной водой до метки; приготовленный реактив содержит 1 мг азота в 1 мл раствора);

6) рабочий стандартный раствор (разводят стандартный раствор в 20 раз; раствор содержит 0,05 мг азота в 1 мл);

7) пергидроль.

Ход определения. У обследуемого микропипеткой набирают 0,2 мл крови (можно использовать сыворотку или плазму крови в таких же количествах) и помещают в центрифужную пробирку, содержащую 2,8 мл реактива для осаждения белка. Содержимое пробирки перемешивают, оставляют на 10 мин при комнатной температуре, затем центрифугируют. В 2 пробирки из тугоплавкого стекла вносят по 0,5 мл центрифугата и прибавляют 0,05 мл концентрированной серной кислоты. В 2 контрольные пробирки наливают по 0,05 мл концентрированной серной кислоты. Пробирки ставят в наклонном положении на песочную баню (во избежание перегрева пробирки должны касаться только верхнего слоя песка). В пробирки вставляют неплотные пробки из увлажненной ваты для улавливания выделяющегося сернистого ангидрида. Сжигание проводят в вытяжном шкафу. В момент, когда исследуемая жидкость буреет, пробирки снимают с бани, охлаждают и в каждую добавляют по 2 капли пергидроля. Затем пробирки вновь устанавливают на песчаную баню. Сжигание считается законченным, когда жидкость в пробирках станет совершенно бесцветной. После этого пробирки снимают с бани, охлаждают и прибавляют в каждую по 10 мл свежепрокипяченной дистиллированной воды. Содержимое пробирок нейтрализуют 50% раствором щелочи до слабощелочной реакции (контроль по изменению цвета лакмусовой бумаги от красного до синего

233

цвета). Излишек щелочи при нейтрализации приводит к помутнению раствора, а недостаток — к выпадению солей ртути. После нейтрализации во все пробирки наливают по 0,5 мл реактива Несслера, и содержимое пробирок окрашивается в желтый цвет разной интенсивности в зависимости от содержания азота. Контрольные пробы имеют слегка желтоватый оттенок, соответствующий окраске реактива Несслера. Более темное окрашивание жидкости в контрольных пробирках указывает на непригодность реактивов. Далее количественное определение остаточного азота в крови можно проводить титрометрическим или колориметрическим способами.

Титрование контрольных проб проводят на белом фоне стандартным раствором до совпадения окраски контрольных и опытных проб. При получ