ый цвет, эритроциты — в розовый.

Техника подсчета. Окрашенный мазок микроскопируют с иммерсионной системой (ок. 7 или 10, об. 90), конденсор поднят, диафрагма открыта. Иммерсионное масло наносят на край мазка в наиболее гонкой его части, ближе к «метелочке». Подсчет эритроцитов и тромбоцитов ведут одновременно. При данном увеличении в поле зрения микроскопа видно около 200 эритроцитов. При подсчете их легко сбиться: одни и те же клетки учесть несколько раз, а другие пропустить. Поэтому прибегают к ограничению поля зрения, для чего в окуляр вкладывают кружок из черной бумаги с прорезанным посередине его Ромбическим отверстием. В ограниченном поле зрения Должно быть видно около 50 эритроцитов. Среди них Располагаются отдельные тромбоциты, которые встречайся не в каждом поле зрения (рис. 45, см. на цвет. вкл.). Сосчитав 1000 эритроцитов, суммируют общее количество Встретившихся тромбоцитов. Определяют количество

152

153

эритроцитов в 1 л крови. Количество тромбоцитов

рассчитывают по формуле: ^

ае I]

X-I000'

где а*—количество тромбоцитов в 1 л крови; а — количество тромбоцитов на 1000 эритроцитов; в—количество эритроцитов в 1 л крови.

Например: при подсчете 1000 эритроцитов встретилось

75 тромбоцитов. Количество эритроцитов в 1л крови— 4,2-10,2. Количество тромбоцитов в 1 л крови=

75-4,2-1012 „ „

= юоо =75-4,2-109=315-10*.

Практически количество тромбоцитов в 1л крови можно получить, умножив число сосчитанных в мазке кровяных пластинок на цифру эритроцитов в миллионах и на 109.

Подсчет тромбоцитов в камере. Определяется количество тромбоцитов в 1 л крови при постоянном ее разведении; подсчет производят в камере Горяева.

Реактив: 1% водный раствор оксалата аммония (прокипяченный и профильтрованный).

Техника подсчета. В химическую пробирку наливают 4 мл оксалата аммония, вносят в нее 0,02 мл (капилляр Сали) крови, хорошо перемешивают. Получают разведение крови в 200 раз. Пробирку оставляют на 20—30 мин для гемолиза эритроцитов. Снова перемешивают и заполняют камеру Горяева. Помещают ее во влажную камеру на 5 мин. Тромбоциты подсчитывают в 25 больших квадратах. Определяют количество тромбоцитов в 1 л крови по формуле:

Л-200-4-109 П

Х~ 400 ггде х—количество тромбоцитов в 1 л крови; Л—количество тромбоцитов, сосчитанных в 25 больших или 400 малых квадратах; 200 — разведение крови; 4-Ю9— множитель, приводящий результат к объему 1 л, так как

j^-, объем жидкости под малым квадратом; 400—число

малых квадратов.

Практически формула сводится к следующему выражению:

х=Л-2'109 тромбоцитов в 1 л крови.

Для лучшего выявления тромбоцитов в камере можно пользоваться фазово-контрастным устройством, которое дает более отчетливое их изображение.

Подсчет тромбоцитов с помощью электронно-автоматических счетчиков. Тромбоциты подсчитывают в плазме крови после самопроизвольного оседания эритроцитов. Может быть использован любой автоматический счетчик частиц типа «Целлоскоп», «Культер». Принцип их действия основан на определении числа электрических импульсов, вызываемых исследуемыми частицами, взвешенными в электропроводной жидкости.

Венозную кровь, смешанную с антикоагулянтом (цитрат натрия), оставляют на несколько часов для оседания эритроцитов и лейкоцитов. Тромбоциты практически не оседают и остаются равномерно распределенными в плазме крови. Плазму разводят изотоническим раствором хлорида натрия и пропускают через счетчик. Используется измерительная трубка с капиллярным отверстием для подсчета тромбоцитов (диаметр 50 мкм). Затем производят второй подсчет, пользуясь измерительной трубкой с большим капиллярным отверстием для подсчета оставшихся в плазме не осевших эритроцитов (диаметр 60 мкм). Разность между результатами первого и второго подсчета показывает истинное количество тромбоцитов.

§ 63. Определение количества ретикулоцитов

Ретикулоциты — молодые незрелые формы эритроцитов, при обычных методах окраски в мазке не выявляются и выглядят так же, как зрелые эритроциты. При специальной окраске в ретикулоцитах обнаруживается нежная сеточка или зернистость — нитчато-сетчатая субстанция.

Особенность окраски ретикулоцитов заключается в том, что они воспринимают краску только в момент, пока клетка, выведенная из кровеносного русла, еще жива. В это время и можно выявить нитчато-сетчатую субстанцию, окрасив ее. Такая окраска называется суправиталь-ной. В высохшем, а тем более зафиксированном мазке крови выявить ретикулоциты уже невозможно.

Окраска азуром II. Приготовление краски. В колбу помещают 1 г краски азур И, 0,4 г хлорида натрия, 5 г цитрата натрия и 45 мл дистиллированной воды. Хорошо перемешивают до полного растворения навесок. Колбу закрывают пробкой и ставят в термостат при температуре 37° С на 2 сут для вызревания. Периодически краску помешивают. Созревшую краску фильтруют в пузырек из темного стекла.

Техника приготовления мазков. В агглютина-ционную пробирку вносят микропипетками 0,05 мл раствора краски азур II и 0,2 мл крови. Тщательно