я:

ОН

ОН

,СН/У\/Х<Ж ОН

НО,

НаСО.

О'

Свободная эллаговая кислота дает красно-фиолетовую окраску при добавлении нескольких кристаллов нитрита натрия и трех-четы-рех капель уксусной кислоты. Для обнаружения связанной элла-говой кислоты (или гекезоксидифенопой) уксусную кислоту заменяют 0,1 н. серной .или соляной кислотой (кармино-красная окраска, переходящая в синюю).

§ 3. Методы выделения а идентификация

Дубильные вещества — это смесь различных полифенолов, имеющих нередко сложную структуру, и очень лабильных, поэтому выделение и анализ индивидуальных компонентов представляет собой большие трудности.

При выделении из растительного материала получают фракции дубильных веществ. Для этого используют-экстракцию растительного материала органическими растворителями: обрабатывают сырье петролейным эфиром, бензолом или смесью бензол — хлороформ (1 : 1) для удаления основной массы хлорофилла, терпе-ноидов и липидов, затем экстрагируют этиловым эфиром, который извлекает некоторые фенольные соединения, в том числе окенкорич-ные кислоты и катехины; после этого проводят экстракцию этила-цетатом, в результате которой в экстракт переходят лейкоантоциа-ны, димерные проантоциапидины, эфиры оксикоричцух кислот и др. В завершение растительный материал экстрагируют метиловым или этиловым спиртом, при этом в раствор переходят многие дубильные вещества и другие фенольные соединенна.

Для получения суммы дубильных веществ используются и другие способу: растительное сырье вначале экстрагируют горячей водой, а затем охлажденный водный экстракт обрабатывают последовательно вышеперечисленными растворителями.

Широко распространено выделение фенольных соединений, в том числе и некоторых компонентов дубильных веществ, осаждением из водных или спирто-водпых растворов солями свинца. Полученные осадки затем обрабатывают разбавленной серной кислотой.

Суммарные извлечения дубильных веществ разделяют на индивидуальные компоненты с помощью хроматографнческнх методов.

Для выделения индивидуальных компонентов дубильных веществ (катехннов, лейкоантоциапидинов и др.) используют различные виды хроматографии: L) адсорбционную хроматографию па колонках целлюлозы, полиамида (иногда вместо полиамида используют гольевой порошок); 2) ионообменную — па колонках катио-нита Дауэкс-50 В в Н+-форме; 3) распределительную хроматографию на колонках силикагаля; 4) протнпоточное распределение; 5) гельфильтрацию на колонках Сефадекса Г-50, Г-100 и Др.

Идентификация индивидуальных компонентов дубильных веществ основана на хроматографических методах (хроматография на бумаге и тонкослойная), спектральных исследованиях, качественных реакциях и изучении продуктов расщепления.

116

П7

Хроматограммы дубильных веществ просматривают в УФ свете к отмечают характер флуоресценции зон адсорбции. Некоторые ирои.'шодные катехинов имеют слабую голубую флуоресценцию, усиливающуюся после обработки хроматограмм парами аммиака. Чаще всего для обнаружения катехинов и лейкоангоцианидинов и их производных на хроматограммах используют 1 %-ный ванилин в концентрированной НС1. Лейкоантоцианидины можно отличить от катехинов при выдерживании хроматограммы в парах соляной кислоты с последующим нагреванием при 105 дС в течение 2 мин, при этом лейкоантоцианидины переходят в аптоцнанидины (розовый, красно-фиолетовый цвет), а катехины остаются бесцветными или желтеют.

Для более деталыгой идентификации веществ используют также методы УФ, ИК и ПМР спектроскопии.

Для изучения структуры дубильных веществ широко применяют гидролиз (в частности, ферментативный с помощью танназы), щелочное расщепление с последующим анализом полученных продуктов.

§ 4, Качественное определспше

Дубильные вещества в растительном сырье определяют качественными реакциями, которые можно подразделить на две группы: реакции осаждения и цветные реакции. Для проведения качественных реакций из растительного сырья готовят водное извлечение.

Методики качественного определения. Приготовление извлечения. 1 г измельченного растительного сырья заливают 100 мл воды. Нагревают на. водяной бане 20—30 мин, процеживают через вату и полученное извлечение используют для проведения качественных (теакций.

1. Качественные реакции извлечения, К 2—3 мл извлечения добавляют по каплям 1 %-ньш раствор желатины. Появляется муть, исчезающая при добавлении избытка желатины.

2. К 2—3 мл извлечения прибавляют несколько капель 1 %-ного хлорида хинина (антипирина). Появляется аморфный осадок.

3. При добавлении к 2—3 мл извлечения 4—5 капель раствора железоаммониевых квасцов в случае гидролизуемых дубильных веществ появляется черно-синее окрашивание или осадок, а конденсированных — черно-зеленое окрашивание или осадок (эта реакция используется для открытия дубильных веществ в растительном материале).

4. К 10 мл извлечения прибавляют 5 мл смеси (2 мл НС1, разведенной в соотношении 1 : 1, и 3 мл 40 %-ного раствора формальдегида). Полученную смесь кипятят 30 мии в колбе, снабженной обратным холодильнико