, желтую флуоресценцию, флуоресцирующие пятна кумаринов отмечают и хроматограммы обрабатывают щелочью. После этого их высушивают в сушильном шкафу при t = 120 °С и вновь просматривают под УФ лампой; как правило, флуоресценция усиливается. Затем хроматограмму обрабатывают дназотированным сульфаниламидом, от действия которого кумарины в зависимости от структуры окрашиваются в оранжевый,

' красио-оранжевын, фиолетовый цвета. В некоторых случаях после Просматривания хроматограммы в УФ свете ее обрабатывают ре-

1 активом Драгендорфа или иодом, Кумарины проявляются в виде

; пятен, окрашенных в коричневый цвет.

; Помимо бумажной хроматографии широко используется метод

^

нкослойной хроматографии. Хроматография проводится в тонком ое оксида алюминия или силикагеля. Хорошее разделение кумаринов D тонком слое было достигнуто при применении следующих

101

систем растворителей: этилаиетат — бензол (1 : 2); хлороформ — петроленный эфир (1 : 2),

Проявление кумаринов на хроматограммах проводится точно так же, как в случае проявления бумажных хроматограмм.

Методики качественного анализа. Приготовление извлечения из растительного сырья, 2 г измельченного сырья (плоды амми большой, пастернака посевного, псоралеи костпнковой, корней горич-ника и порезника густоцветного и др.) заливают 20 мл этилового спирта в кипятят в течение 16 мин с обратным холодильником. После охлаждения фильтруют.

Качественные реакции. 1. К 3—5 мл спиртового извлечения прибавляют 10 капель 10 %-ного КОН в метиловом

о о

О'

о о о о

о о о о

О О

О

2 д

г &

1 а 6

о о о

tad. 2 dud. J

Рис 22 Схема хроматограммы (ТСХ) кумаринов плодов псоралеи костяико-вой №. *"мн большой (2) и пастернака посевного (J):

а — И3011ИМ-

анселици til

а — псоралеи:

^Осргаптев: д - (сеантоксьн

Рис 23, Схема хроматограммы (ТСХ) кумаринов корней горичпика Мори-сона (/), порезника густо-цветкового (2), вздуто-плодника сибирского (3):

а — петиедани": 6 — втерик-иИ; » - аигиаПОИЯЩИВ

спирте и нагревают в течение 5 мин на водяной бане (при нали-. чин кумаринов раствор желтеет), затем прибавляют 5 капель свежеприготовленного диазореактива Паули по Кутачеку. При наличии кумаринов раствор приобретает окрашивание от коричнево-красного до вишневого.

2. К 3—5 мл спиртового извлечения добавляют 10 капель 10 %-ного КОН в метиловом спирте; раствор нагревают на водяной бане. "Затем добавляют 5—10 мл дистиллированной воды и хорошо пере-мепшвают, после чего раствор нейтрализуют 10 %-ной НС1 до кислой реакции. Если при этом наблюдается помутнение или вы-

102 падение осадка, то это указывает на вероятное присутствие кумаринов в сырье (лактонная проба).

Хроматографическое определение. 3 а. Из оставшейся части спиртового извлечения берут 0, 01 мл и наносят на пластинку «Силуфол» или силикагеля (закрепленный слой) и хроматографируют в системе h-гексан — бензол — метиловый спирт (5:4:1) до тех пор, пока линия фронта не достигнет расстояния 10 см от линии старта. После этого хроматограмму высушивают на воздухе в течение 10 мин, опрыскивают 10%-пым КОН в метаноле и высушивают в сушильном шкафу при t — 110—120 СС в течение 2—3 мин. Затем опрыскивают свежеприготовленным реактивом Паули по Кутачеку. При наличии кумаринов в сырье на х-роматограмме проявляются яркие пятна от кирпично-красногодосине-фиолетово-го окрашивания в зависимости от структуры кумаринов (рис. 22, 23).

36. 0,01 мл спиртового извлечения наносят на полосу хроматографической бумаги марки «Б» размером 14 X 65 см, предварительно импрегнпрованной 10 %-ным формамидом в метиловом спирте, и хроматографируют нисходящим методом в смеси растворителей, петролейнын эфир — бензол — метиловый спирт (5 ; 4 : 1) в течение 3—4 ч. Хроматограмму высушивают на воздухе в течение 10 мин, опрыскивают 10 %-ным КОН в метиловом спирте и высушивают в сушильном шкафу при t — 310—120 °С в течение 2—3 мин, затем опрыскивают диазореактнвом Паули по Кутачеку. При наличии кумаринов в сырье па хроматограмме появляются яркие пятна от кирпичко-красного до сине-фиолетового окрашивания.

Реактивы и оборудование: этиловый спирт (этанол): КОН, 10%-ный раствор в метиловом спирте; НО 10%-ная; CaS04; м-гексан; бензол; метиловый спирт (метанол), 10%-ный раствор в метиловом спирте; петролей-ный эфир ftim — 60 - 100 Бумага хроматографическая марки Б; пластинка «Силуфолг; силикагель марки КСК: камеры хроматографические для ТСХ и БХ; колбы с нормальным шлифом вместимостью 50 мл; холодильники (обратные) стеклянные лабораторные с нормальным шлифом; воронки стеклянные для фильтрования диаметром 5 см; пробирки стеклянные; шкаф сушжльный лабораторный; микропипеткн измерительные вместимостью 0,2 мл; пластинки стеклянные для ТСХ размером 13 X X IS см; цилиндры мерные на 250 мл,

§ 5. Количественное определение

При количественном определении кумаринов учитывается то или иное специфическое свойство кумарина. Способность лактон-ного кольца кумарина к обратимому размыканию и замыканию в зависимости от рН среды использ